课时目标:1.目的要求: 掌握免疫原、抗血清、多克隆抗体的概念,掌握动物选择、免疫方法、动物采血、抗血清的纯化和鉴定及保存方法,掌握单克隆抗体及基因工程抗体的概念;熟悉免疫佐剂的概念、种类和作用机制,熟悉细胞破碎、可溶性抗原的提取、纯化及鉴定方法,熟悉杂交瘤技术的基本原理及HAT培养基的筛选机制,熟悉单克隆抗体在医学中的应用;了解人工结合抗原、人工合成抗原的制备,常用载体的类型、半抗原与载体的连接方法、半抗原性免疫原的鉴定,了解基因工程抗体的类型。2.学时分配:讲授3学时,自学2学时。3.教学重点: 免疫原、抗血清、多克隆抗体的概念,动物免疫方法、抗血清的纯化和鉴定。4.教学难点:半抗原与载体的连接方法、半抗原性免疫原的鉴定,杂交瘤技术基本原理及HAT培养基的筛选机制,基因工程抗体的类型及制备技术。
5.教学内容:
第一节 免疫原的制备
一、颗粒性抗原:人和各种动物细胞抗原、细菌抗原和寄生虫抗原等
二、可溶性抗原:组织和细胞可溶性抗原的粗提、可溶性抗原的纯化、免疫球蛋白片段的制备
三、半抗原:载体的选择、半抗原-载体的连接方法
第二节 免疫佐剂
一、佐剂的种类
二、佐剂的生物学作用
三、佐剂的作用机制
第三节 多克隆抗体的制备及作用
一、免疫动物的选择:抗原与动物种属之间的关系、动物的个体因素、抗原的性质与动物种类、抗体的用量和要求
二、抗原剂量的选择
三、免疫程序
四、采血方法:颈动脉放血法、静脉采血法、心脏采血法
五、抗血清鉴定及保存:抗体效价和纯度的测定、抗体特异性的鉴定、抗体亲和力的鉴定及抗血清的保存
六、抗体的纯化:IgG类抗体的纯化、特异性抗体的纯化
七、多克隆抗体的特性和应用
第四节 单克隆抗体的制备及应用
一、杂交瘤技术的基本原理
二、杂交瘤细胞的制备过程:亲本细胞的选择和融合、选择培养基的应用、抗原特异性杂交瘤细胞的筛选
三、单克隆抗体的生产:动物体内诱生法、体外细胞培养法、兔单克隆抗体
四、单克隆抗体纯化
五、单克隆抗体鉴定:抗体效价测定、抗体特异性鉴定、Ig类型鉴定;
六、单克隆抗体的特性:高度特异性、高度均一性、弱凝集反应和不呈现沉淀反应、细胞毒作用较弱、对环境敏感性
七、单克隆抗体的应用:临床检验诊断试剂、蛋白质的纯化、肿瘤的导向治疗、放射免疫现象技术
第五节 基因工程抗体及应用
一、人源化抗体:人-鼠嵌合抗体、CDR植入抗体
二、小分子抗体:抗原结合片段、可变区片段和单链抗体、重链抗体
三、双特异抗体:双特意抗体分子的构建、双特异抗体的应用
四、抗体融合蛋白:含Fab段或Fv的抗体融合蛋白、含Fc的抗体融合蛋白
五、噬菌体抗体库技术:天然抗体库、免疫抗体库、合成抗体库
六、重组多克隆抗体:人抗体库的构建与筛选、位点特异性整合技术、制备流程
七、基因工程抗体的应用:用于肿瘤的治疗、肿瘤的影像分析、抗感染作用、细胞内抗体、用于临床诊断